مستخدم:Dr-Taher/أومو كروموتيست
بالنسبة لعلم الأدوية وعلم الوراثة ، فإن اختبار Umu Chromotest ، الذي تم تطويره ونشره لأول مرة بواسطة Oda et al.، [1] هو اختبار بيولوجي ( اختبار حيوي ) لتقييم الإمكانات السامة للجينات للمركبات الكيميائية مثال للتنقيح. يعتمد على قدرة العوامل المسببة لتلف الحمض النووي على تحفيز التعبير عن الأوبرون أومو. فيما يتعلق بالجينات المسببة للضرر (din) recA وlexA وumuD، فإن جين umuC يشارك بشكل أساسي في الطفرات البكتيرية من خلال استجابة SOS .مثال للتنقيح
يستخدم هذا الاختبار اندماج الأوبرون عن طريق وضع الأوبرون lac (المسؤول عن إنتاج β-galactosidase، وهو بروتين يقوم بتحلل اللاكتوز) تحت سيطرة البروتينات المرتبطة بـ umu.مثال للتنقيح من الممكن إجراء اختبار لوني بسيط عن طريق إضافة نظير اللاكتوز الذي يتحلل بواسطة β-غالاكتوزيداز، مما ينتج مركبًا ملونًا يمكن قياسه كميًا من خلال القياس الطيفي . درجة تطور اللون هي مقياس غير مباشر لكمية البيتا غالاكتوزيداز المنتجة، والتي ترتبط بدورها بشكل مباشر بكمية الضرر الذي يلحق بالحمض النووي.مثال للتنقيح
يتمتع جهاز Umu Chromotest بميزة إضافية تتمثل في تدوين إجراءاته بموجب ISO 13829 "جودة المياه - تحديد السمية الجينية للمياه ومياه الصرف الصحي باستخدام جهاز umu-test".مثال للتنقيح على الرغم من أنه لا يمكن ربط السمية الجينية بشكل مباشر بتطور السرطان لدى البشر، فقد ثبت وجود ارتباط قوي بين التأثيرات السامة للجينات في البكتيريا وخصائصها المسببة للطفرات والأورام في الثدييات.مثال للتنقيح [2] [3]
نظرية
[عدل]تتعرض بكتيريا Salmonella typhimurium TA 1535 [pSK 1002] لمركبات اختبار سامة للجينات في صفيحة دقيقة مكونة من 96 بئرًا. إذا تم إنتاج آفات سامة للجينوم في الجينوم البكتيري، مثال للتنقيحيتم تحريض جين umuC كجزء من استجابة SOS العامة. يحتوي البلازميد pSK1002 على جين umuC المندمج مع جين المراسل lacZ، تمامًا مثل الاندماج في SOS Chromotest. وبالتالي فإن تحفيز الجين umuC هو مقياس للقدرة السامة للعينة. نظرًا لأن جين umuC مندمج مع جين lacZ لإنزيم بيتا غالاكتوزيداز، يمكن تقييم تحفيز جين umuC بسهولة من خلال تحديد نشاط بيتا غالاكتوزيداز، والذي يتم قياسه من خلال تحويل ركيزة ONPG عديمة اللون (o-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) إلى المنتج الأصفر o-nitrophenyl بواسطة إنزيم بيتا غالاكتوزيداز المشفر بواسطة lacZ.مثال للتنقيح [4]
نظرًا لأن استجابة SOS هي استجابة عامة للآفات السامة للجينات، فإن سلالة واحدة من S. typhimurium مع بنية الجين المراسل المناسبة تكفي لتحديد جميع فئات السموم الجينية البكتيرية. كما هو الحال مع اختبارات السمية الجينية والطفراتمثال للتنقيح البكتيرية الأخرى، يمكن التحقق من المركبات التي تتطلب التنشيط الأيضي للنشاط بإضافة مستخلص كبد الفئران الميكروسومي S9.مثال للتنقيح
إجراء
[عدل]تتعرض بكتيريا S. typhimurium في المرحلة الأسيّة من النمو لمدة ساعتين لتركيزات متناقصة من عينة الاختبار في ثلاث نسخ، بما في ذلك الضوابط الإيجابية والسلبية، وكذلك الفراغات. بعد مرور ساعتين،مثال للتنقيح يتم تخفيف الثقافات المعرضة للتعرض في وسائط نمو جديدة ويسمح لها بالنمو لمدة ساعتين إضافيتين. يتم تقييم تحريض جين umuC وجين المراسل lacZ المندمج والتعبير اللاحق عن β-galactosidase بعد تحلل البكتيريا. يتم تحويل ONPG عديم اللون إلى المنتج الأصفر o-nitrophenyl في وجود β-galactosidase المستحث. ترتبط شدة اللون بكمية البروتين المستحث وبالتالي قوة السمية الجينية لعينة الاختبار.مثال للتنقيح
يتم استخدام المقاييس الكمية، مع قراءة امتصاص اللوحة عند OD600 قبل وبعد مرحلة النمو، بالإضافة إلى OD420 بعد حضانة ONPG. مثال للتنقيح يسمح هذا بحساب نسبة الحث (IR)، بالإضافة إلى عامل النمو من أجل تحديد ما إذا كانت السمية الخلوية موجودة أيضًا وإبطال قيم IR.مثال للتنقيح [5]
المزايا
[عدل]إن الارتباط الوثيق بين اختبار Umu Chromotest واختبار Ames التقليدي للطفرات يدعمه كبديل معقول للاختبار في المرحلة المبكرة لآلاف المواد الكيميائية الصيدلانية والزراعية والصناعية الجديدة التي يتم تصنيعها كل عام. تتمتع معظم الشركات المصنعة للمواد الكيميائية الكبيرة بالقدرة على فحص 100 مادة كيميائية صناعية أو أكثر سنويًا باستخدام اختبار Ames التقليدي، والذي يتطلب استخدام العديد من سلالات السالمونيلا. إن اختبار أومو،مثال للتنقيح الذي يستخدم سلالة واحدة فقط من السالمونيلا، قد يكون من الممكن أن يختبر مجموعة أكبر من المواد الكيميائية الجديدة باستخدام نفس الموارد. إن انخفاض تكلفة المواد والعمالة، فضلاً عن متانتها، يجعلها أيضًا شاشة مناسبة للعينات البيئية المعقدة.مثال للتنقيح [6]
مراجع
[عدل]- ^ Yasunaga, Kiyonari, Oikawa, Abe, Yoshikawa (1985). "Evaluation of the new system (umu-test) for the detection of environmental mutagens and carcinogens". Mutation Research. ج. 147 ع. 5: 219–229. DOI:10.1016/0165-1161(85)90062-7. PMID:3900709.
{{استشهاد بدورية محكمة}}: صيانة الاستشهاد: أسماء متعددة: قائمة المؤلفين (link) - ^ Mohn (1981). "Bacterial systems for carcinogenicity testing". Mutation Research. ج. 87 ع. 2: 191–210. DOI:10.1016/0165-1110(81)90032-4. PMID:6799816.
- ^ Purchase (1982). "An appraisal of predictive tests for carcinogenicity". Mutation Research. ج. 99 ع. 1: 53–71. DOI:10.1016/0165-1110(82)90031-8. PMID:6811893.
- ^ Reifferscheid, Heil, Oda, Zahn (1991). "A microplate version of the SOS/umu-test for rapid detection of genotoxins and genotoxic potentials of environmental samples". Mutation Research. ج. 253 ع. 3: 215–222. DOI:10.1016/0165-1161(91)90134-T. PMID:1720196.
{{استشهاد بدورية محكمة}}: صيانة الاستشهاد: أسماء متعددة: قائمة المؤلفين (link) - ^ ISO 13829 "Water Quality- Determination of genototoxicty of water and waste water using the umu-test.
- ^ Yasunaga, Kiyonari, Oikawa, Abe, Yoshikawa (2004). "Evaluation of the Salmonella umu test with 83 NTP chemicals". Environ Mol Mutagen. ج. 44 ع. 4: 329–45. DOI:10.1002/em.20053. PMID:15476194. S2CID:7419454.
{{استشهاد بدورية محكمة}}: صيانة الاستشهاد: أسماء متعددة: قائمة المؤلفين (link)